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研究显示，实验室自建检测方法（LDTs）和体外诊断（IVD）标记检测方法评估中CLDN18.2的一致性良好。
胃癌是2022年全球相关死亡的第五大原因，每年发病率接近100万例[1]。Claudin 18.2（CLDN18.2）是胃癌的生物标志物和药物靶点[2]。Zolbetuximab（佐妥昔单抗）作为一种靶向CLDN18.2的单克隆抗体药物，已在多个国家获批用于CLDN18.2阳性、HER2阴性的局部晚期不可切除或转移性胃/胃食管结合部（G/GEJ）腺癌的治疗。目前，伴随诊断（CDx）检测方法CLDN18（43-14A）免疫组化检测已获批准，作为经过分析和临床验证的佐妥昔单抗检测方法[3]。然而，一些机构使用的是实验室自建检测（LDTs）和体外诊断（IVD）标记的检测方法。一项非干预性研究通过能力验证评估了德国、奥地利和瑞士（DACH地区）的医疗机构使用LDTs和IVD标记检测胃癌样本中CLDN18.2表达的性能[4]。现将研究主要内容梳理如下，以启迪临床。
研究方法
该研究包括准备、独立能力验证（IPT）和开放能力验证（OPT）阶段，并由QuIP（一家经认证的机构）用于外部质量保证（EQA）能力验证试验。在IPT阶段，牵头机构通过CE-IVD认证的CLDN18（43-14A）对预验证的病例样本切片染色，并达成一致的共识评分，从中选择用于OPT的样本。在OPT阶段，各参与机构分别对样本进行染色、评分和解读，并将染色肿瘤细胞百分比以及CLDN18.2阳性/阴性等分析结果提交给QuIP。各参与机构需正确判断≥90%的病例才能成功参与，若≥80%的实验室成功参与，则OPT的整体水平可接受。
基于佐妥昔单抗的III期研究的入组标准，CLDN18.2阳性的定义为：≥75%的肿瘤细胞膜表达CLDN18，且染色强度≥2+。
研究结果
在IPT阶段，7个牵头机构对于20个CLDN18.2表达水平不同的病例进行了IPT，结果具有90%的高度一致性，从中选择10个病例用于OPT，并为每个病例定义了参考值。
表1 病例选择情况及其参考值
在OPT阶段，共有54个机构参与，其中1个退出。德国机构共45个（83%），包括1个退出的机构；奥地利机构共5个（9%），瑞士机构共4个（7%）。最终79.2%（42/53）的机构成功参与。
从10个病例的整体分析情况来看，病例2、5、8和10显示出最低的准确性和最高的假阴性率（FNR）。总体关键指标显示，假阴性是主要的错误评估因素，FNR达12%，假阳性率（FPR）仅1%。真正阴性率（TNR）为99%，真正阳性率（TPR）为88%。总体准确率为91%。
表2 OPT阶段各病例的CLDN18.2分析情况
表3 OPT阶段各病例的关键指标
52个机构提供了用于CLDN18.2检测的抗体及步骤，不同抗体的代表性免疫染色结果有所不同（图1）。结果发现，25%的机构存在孤立的染色问题，6%的机构在个别病例的解读上存在问题，4%的机构提交的结果既有低质量染色，又偶尔存在解读错误。
图1 不同抗体的CLDN18.2免疫染色结果。（A）43-14A克隆抗体显示出100%肿瘤细胞的强（3+）且均匀的膜免疫染色；（B）EPR19202抗体染色的肿瘤细胞少于50%，显示出弱（1+）、几乎无法检测到的膜染色；（C）ZR451抗体染色肿瘤细胞，显示100%弱（1+）至中等（2+）膜染色；（D）ZR451抗体染色平滑肌细胞，超过50%的肿瘤区域为阴性。
在用于检测的抗体方面，使用最频繁的是43-14A克隆抗体（28个参与机构使用），总体上未观察到显著的染色质量或解读问题。
对于ZR451克隆抗体，9个实验机构使用，但染色质量不佳，肿瘤细胞有高对比度的膜染色，但也有明显的细胞质染色。ZR451克隆抗体导致4个失败结果，且其成功的染色结果质量也非最佳。此外，ZR451克隆抗体对平滑肌细胞显示出非特异性弱染色，这提示，消除背景染色的影响可能会降低检测的灵敏度。特别是对于病例2和8，使用ZR451克隆时显示出了较高的FNR。
5个参与机构使用EPR19202克隆抗体，且均显示出染色缺陷，显示出细胞质和弱的膜染色，因此相比其他抗体，既存在灵敏度问题，也存在特异性问题。EPR19202克隆抗体出现多次假阴性评估，特别是对于病例2、5、8和10。
综上，ZR451和EPR19202克隆抗体导致了75%（9/12）的失败结果。如果没有使用这两种抗体，成功率将提高到超过80%。
此外，有3个参与机构使用CLDN18抗体。该抗体显示出整体强烈的高对比度免疫反应，可能难以区分较强的细胞质染色和膜染色，导致1个参与机构出现不一致结果。1个参与机构使用了CLDN18.2抗体，这种抗体的染色特异性高度可疑，个别肿瘤细胞显示出强烈的细胞质免疫反应，从而导致解读错误。还有2个实验机构使用了多克隆兔抗体，1个实验室使用了MM02抗体，这些均被评估为最佳染色，且未导致解读错误。
研究结论
精准检测CLDN18.2表达水平是筛选适合接受佐妥昔单抗等CLDN18.2靶向治疗的G/GEJ腺癌患者的关键环节，将有助于实施个性化癌症治疗，提高治疗效果。这项研究的OPT结果显示，DACH地区的实验机构对胃癌中CLDN18.2评估的整体一致性良好，成功率达到79.2%，即53个参与机构中有42个成功。而主要的失败原因是抗体选择相关的染色问题，解读错误并不是主要因素。其中，43-14A克隆抗体的染色结果最佳。EPR19202克隆抗体染色强度过弱，存在敏感性和特异性问题，显示出较差的分析性能，无法准确检测CLDN18.2。ZR451克隆抗体对细胞质背景染色较高，优化背景能会丧失敏感性丧失，也显示出较差的性能。
然而，该研究中参与机构的数量较少，且地理位置无法全面反映胃癌中CLDN18.2检测的诊断情况，因此研究结果尚存在一定局限性。总体而言，DACH地区的实验机构建立的LDT具有与市场上已有的CE-IVD认证的CLDN18（43-14A）检测相当的质量，能够用于确定CLDN18.2的状态。此外，选择适当的抗体是分析成功的主要因素。
参考文献：
[1]Bray F, et al. Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 2024;74(3):229-263.
[2]Sahin U, et al. Claudin-18 splice variant 2 is a pan-cancer target suitable for therapeutic antibody development. Clin Cancer Res. 2008;14(23):7624-7634.
[3]Shitara K, et al. Zolbetuximab plus mFOLFOX6 in patients with CLDN18.2-positive, HER2-negative, untreated, locally advanced unresectable or metastatic gastric or gastro-oesophageal junction adenocarcinoma (SPOTLIGHT): a multicentre, randomised, double-blind, phase 3 trial. Lancet. 2023;401(10389):1655-1668.
[4]Röcken C, et al. Concordance of laboratory assays for claudin 18.2 in gastric cancer tissue samples: independent proficiency testing and a descriptive non-interventional study. Virchows Arch. Published online June 28, 2025.
审批号：CN-165604有效期至：2026-08-06
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